Какова Рекомбинантная плазмида?
Плазмида - круглая часть ДНК, которая найдена во многих бактериях. Наиболее достойная внимания особенность плазмид - то, что они копируют независимо от host с главная ДНК. Часто плазмида используется в рекомбинантной технологии клонирования, чтобы имитировать недавно изолированные гены. Также очень распространено использовать рекомбинантную плазмиду, чтобы выразить большое количество известного гена, чтобы получить РНК или белок от этого. Такая рекомбинантная экспрессия гена была необходима для промышленности биотехнологии.
Рекомбинантные плазмиды были сначала разработаны у крысы лаборатории бактериального мира, Escherichia coli . Много других типов бактерий могут питать такие плазмиды. Эти оспины самомультиплицирования ДНК могут перейти естественно между различными типами бактерий. Несмотря на это, было иногда трудно ввести рекомбинантные плазмиды в другие виды бактерий.
основная процедура по тому, чтобы ввести ДНК в другие клетки известен как превращение, на котором бактерии обрабатывают с химикатами, которые делают их более вероятно, чтобы поднять иностранную ДНК. Другая методика включает ударять бактерии с электрическим током. Это известно, поскольку electroporation.
Причины создания рекомбинантной плазмиды изменяются. Часто, когда ДНК сначала изолирована от специфической ткани или организма, она преобразована в плазмиды, чтобы создать библиотеку. Тогда ДНК может быть извлечена из отдельных колоний. Затем, они могут быть экранированы секвенированием ДНК, чтобы определить, какие типы генов присутствуют, если последовательности присутствуют в базе данных. Иногда гены с неизвестными функциями имитируются.
В других случаях генное изделие известно, но исследователи хотят выразить большое количество его для дальнейшего исследования. Ген может имитироваться в рекомбинантные плазмиды, которые являются сверхвекторами экспрессии. Они разработаны особенно, чтобы произвести большое количество РНК или белка. Это было особенно ценно для рекомбинантных человеческих белков, которые ранее были часто только доступны от трупов, делая это очень трудный изучить функцию специфического гена.
Несколько факторов включаются в построении плазмиды, которая может использоваться в молекулярном клонировании. У плазмиды должен быть селектируемый маркер. Это позволяет выбрать клетку с геном. Обычно, совокупность клеток, испытывающих недостаток в гене с маркерным геном значительно, превосходит численностью количество клеток, которые несут это. Вообще рекомбинантная плазмида имеет устойчивость антибиотику, или может вырасти в отсутствие специфической аминокислоты.
Такая плазмида нуждается в репликаторе, таким образом, она может начать синтезировать свою рекомбинантную ДНК. Кроме того, рекомбинантная плазмида требует, чтобы ряд специальных последовательностей позволил ферменту ограничения расщеплять ДНК, чтобы позволить гену быть вставленным в клонирующий вектор. Есть большое количество ферментов ограничения, которые являются узкоспециализированными для определенных последовательностей ДНК, которые должны присутствовать где генные запуски и концы.
Традиционные деформации бактерий использовались для имитации ДНК в течение многих десятилетий. Дополнительно, есть новые котята, которые используют особенно созданные бактериальные штаммы, чтобы облегчить сверхотжимание генного изделия. Они комбинируют технологию для того, чтобы имитировать ген с методом, который учитывает легкую очистку белка, выраженного от гена, как только это имитировалось в рекомбинантную плазмиду.